Evaluación objetiva de la motilidad de los espermatozoides epididimarios de ciervo ibérico. Relaciones con la congelabilidad y la calidad del semen

Résumé

El análisis de motilidad espermática es una de las pruebas más utilizadas en la valoración de la calidad seminal. No obstante, la valoración subjetiva realizada con los análisis de calidad rutinarios puede estar sesgada por los técnicos, especialmente las determinaciones de motilidad, pues siendo muy susceptibles al error humano, llevan a obtener distintos grados de imprecisión. Además, con la valoración subjetiva de la motilidad, no es posible conocer algunos aspectos muy importantes de la misma como son la velocidad real del espermatozoide o su tipo de movimiento y trayectoria. Aun así, en la mayoría de los trabajos es habitual realizar la evaluación de la calidad del movimiento y del porcentaje de motilidad mediante un análisis visual bajo el microscopio, habiéndose observado ciertos problemas al comparar los resultados de estas evaluaciones rutinarias con las tasas de fertilidad obtenidas mediante inseminación artificial. Esto ha puesto de manifiesto la necesidad de disponer de técnicas fiables de valoración que permitan predecir el estado de los espermatozoides y su relación con la capacidad fecundante. Así, y para intentar solucionar estos problemas, diversos laboratorios han desarrollado desde hace algunos años sistemas de evaluación objetivos de la motilidad, destacando entre ellos los sistemas de análisis de imagen por ordenador. Estas técnicas computerizadas de imágenes, como es la tecnología CASA (Computer-Assisted Sperm Analysis), son capaces de emitir informes con un número elevado de las características de motilidad de los espermatozoides individuales, además de generar las medidas con mucha más rapidez, minimizando una gran parte del factor subjetivo de los análisis rutinarios de semen y garantizando una mejor correlación con la capacidad fecundante de los espermatozoides. Asimismo, permiten acumular datos de las relaciones entre la motilidad espermática y su competencia funcional. Por lo tanto, usando el sistema CASA, se ha permitido el estudio de los parámetros objetivos de motilidad de los espermatozoides epididimarios de ciervo ibérico (Cervus elaphus hispanicus) obtenidos post mortem llevado a cabo en esta tesis, disponiendo para ello de material seminal procedente de los epidídimos de ciervos ibéricos abatidos en su hábitat natural durante los meses de octubre a febrero en 13 fincas de caza. El primer objetivo de esta tesis se ha orientado a la mejora del conocimiento de las características de motilidad de los espermatozoides de ciervo ibérico obtenidos post mortem, así como a su relación con la calidad espermática evaluada inicialmente, con el fin de aplicar estos conocimientos a las técnicas de reproducción asistida, especialmente a la inseminación artificial (IA). Para ello, se caracterizaron los parámetros objetivos de motilidad para las muestras espermáticas recién obtenidas, para esas mismas muestras después de haber sido sometidas a un proceso de criopreservación, y por último después de un período de incubación de 2 horas a 37ºC. Destacar, que tras el proceso de congelación-descongelación, se observó un aumento de los valores de los parámetros de motilidad de los espermatozoides, no ocurriendo lo mismo tras el período de incubación de las muestras durante dos horas a 37ºC, pues en este caso se observó un una pérdida de la calidad del movimiento por el descenso de todos los parámetros cinéticos estudiados. Para el segundo objetivo, se compararon los resultados obtenidos en la evaluación rutinaria de calidad espermática a partir de la estimación visual por el microscopio, con los parámetros objetivos de motilidad obtenidos mediante el análisis CASA, comprobándose que la mayoría de los parámetros objetivos de motilidad están relacionados con el porcentaje total de espermatozoides móviles (MI), siendo el parámetro más afectado por el proceso de congelación-descongelación la funcionalidad de la membrana plasmática (E+). Como tercer objetivo de esta tesis, se estudió la influencia de las características intrínsecas y extrínsecas al macho, sobre los parámetros objetivos de motilidad, observándose la existencia de diferencias significativas entre meses para la mayoría de los parámetros estudiados, especialmente para los índices LIN y STR. Como era de esperar, las muestras presentaron una calidad mayor en los meses de la época reproductiva de fotoperíodo decreciente, tanto en muestras recién obtenidas como descongeladas, lo que hace pensar en la conveniencia de criopreservar las muestras recogidas durante los primeros meses de la época reproductiva. En cuanto a la influencia de los parámetros corporales de los ciervos sobre los parámetros objetivos de motilidad de los espermatozoides, las características corporales influyeron en las variables respuesta en la mayoría de los casos, habiéndose observado en esta tesis, que el perímetro torácico del animal afecta negativamente a los valores objetivos de los índices de linealidad (LIN) y rectitud (STR), lo que podría hacer pensar que los ciervos con mayor peso corporal presentan una menor progresividad de sus espermatozoides. Por último, el cuarto objetivo de esta tesis se orientó al estudio de la importancia del análisis de los parámetros objetivos de motilidad en la selección de las muestras que podrían presentar una mejor resistencia a la congelación, lo que permitiría obtener unos mejores resultados en inseminación artificial (IA). Para ello, se usó el sistema Sperm-Class Analyzer ® (CASA) con el fin de averiguar si permitía discriminar entre los machos clasificados según la calidad inicial de las muestras espermáticas como ¿buenos¿ o ¿malos¿ congeladores. Los resultados indicaron que de todos los valores de motilidad estudiados mediante el análisis objetivo CASA, sólo la velocidad curvilínea (VCL) mostró diferencias estadísticamente significativas (P<0,005) entre los grupos de ¿buenos¿ y ¿malos¿ congeladores. De lo anteriormente expuesto destacar que el análisis mediante CASA permite seleccionar las muestras que podrían presentar una mayor resistencia a la congelación, pues ha permitido discriminar entre machos ¿buenos¿ y ¿malos¿ congeladores. Además ha mostrado que la calidad de las muestras espermáticas es mayor durante los meses de fotoperíodo decreciente, lo que hace pensar en la conveniencia de criopreservar las muestras en los primeros meses de la época reproductiva.